Vanliga problem när ultraljudshomogenisatorn bryter mot Escherichia coli

E. coli uttrycker främmande protein. Vid sonikering suspenderas den i PBS innehållande 1% triton-X-100. Ultraljudseffekten är bättre. Effekten av 1% triton-X-100 är fortfarande uppenbar. Verk, såsom Streptomyces.

Bakteriell nederbörd lägger direkt till prov 1 buffert, tillsätt 5 ml merkaptoetanol, blanda, centrifugera, koka i 10 min, direktbelastning, färgning och avfärgningssteg är följande: sätt limet i lämplig mängd färgämne i mikrovågsugnen i 1 min, färgningen lösningen ersätts av en stor mängd Vattnet kan kokas i mikrovågsugnen i 10 minuter.

Efter att ha uttryckt det rekombinanta proteinet stördes cellerna med ultraljudsvåg, med användning av ett isbad, 400W och 2S stoppades för 1S, men en stor mängd skum genererades på kort tid vilket påverkade krossverkningsgraden. Både pbs och tris buffertar var desamma, och slutligen var krossningen ofullständig. Men mitt målprotein är i dessa obrutna celler, vilket gör att jag inte kan få experimentella resultat.

Låt mig ge dig en analys av varför denna situation och lösning.

1. Bubblor kommer att genereras eftersom sondläget inte är placerat bra, sonden måste vara nära botten, ca 1 cm (jag är vanligtvis 0,5 cm från botten), instrumentet kommer att ha olika effektnivåer, men du kan observera sida, det finns fluktuationer men inte vara för aggressiva.

2. Super 3S slutar 10S, ultraljud ca 20 gånger för att se effekten

3. Var uppmärksam på hornets position. Om du inte är korrekt bör du justera den i tid. Dessutom, från perspektivet av koncentrationen av bakterier, försök att öka volymen vid krossning, styrkan bör inte överstiga 60%.

4. Försök 8S för Super 8S. För vissa bakteriella proteiner är din metod svår att sprida värme, vilket resulterar i protein denaturering och bubbla generation. Det är bäst att pausa lite längre. Detta är vanligare i form av inklusionskroppar.